1.細胞吸除培育瓶內(nèi)舊培育液。

2.參加無菌pbs洗液（5-8mL）悄悄潤濕細胞，稀釋多余的培育基，之后吸走洗液，動作要輕，不可吹打到細胞。

3.向瓶內(nèi)參加含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許，以能覆滿瓶底為限。 

4.置溫箱中2~5分鐘，一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細胞質回縮，細胞間隙增大后，細胞變圓，比較松動后，當即終止消化。
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5.參加該細胞對應的培育基6mL（T25培育瓶）或12mL（T75培育瓶）終止消化。

6.用吸管通過吸取的培育基悄悄反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時應盡量以少的次數(shù)將細胞從壁上吹下，不只要操控吹打的力度、次數(shù)，還要留意要將細胞盡可能吹成單個。這樣既能削減死細胞，又能便于細胞再次均勻貼壁成長。

7.依據(jù)傳代份額，將細胞懸液分瓶，再補充培育基后，靜置于溫箱培育，直止貼壁。

貼壁細胞在培育瓶長成致密單層后，持續(xù)成長的空間缺乏，培育基中的養(yǎng)分成份也耗費較多，同時代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培育，對細胞進行傳代擴增。關于貼壁不太緊的細胞如293，能夠直接吹散后分瓶。而關于貼壁較緊的細胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶。

關于懸浮細胞換液時只需要補液就行。

懸浮細胞的傳代則不需要用胰酶消化，直接通過計數(shù)算好傳代的份額，直接分瓶，補液。有些懸浮細胞趨于成團成長，此刻細胞成長狀態(tài)杰出，當補液時，防止吹打。典型實例：jurkat便是成團成長。當jurkat細胞密度比較大時，可將培育瓶豎直放置2分鐘左右，待大部分細胞沉下，吸走上層清液，補充等量的新鮮培育基。