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Q1.標(biāo)曲不顯色或顯色很弱,樣本顯色
溶解標(biāo)準(zhǔn)品以及倍比稀釋時(shí),未渦旋震動(dòng)或不夠充沛。標(biāo)準(zhǔn)品溶解、倍比稀釋時(shí)均需要渦旋震動(dòng)以確保充沛混勻。單純依托移液器重復(fù)吹打,效率較低、作用也不一定jia。
Q2.標(biāo)曲和樣本均不顯色
在孵育階段靜置在桌面上,這樣非常不利于抗原抗體之間的充沛接觸,導(dǎo)致顯色偏弱。引薦孵育階段,運(yùn)用ELISA的微孔板振蕩器,調(diào)至適宜的頻率,使抗原抗體充沛接觸,確保結(jié)合作用。
Q3.標(biāo)曲顯色,樣本不顯色
當(dāng)樣本中意圖蛋白濃度極低或許樣本中干擾因素較強(qiáng),就無法檢測到?,F(xiàn)在ELISA仍然是蛋白檢測靈敏度gao的方法,與不同技術(shù)結(jié)合后,衍生出了多種類型的ELISA,提高了檢測靈敏度。
Q4.標(biāo)曲和樣本都顯色,但復(fù)孔的CV大
這個(gè)問題就跟移液器和試驗(yàn)者的操作有關(guān)了。移液器的運(yùn)用保護(hù)不標(biāo)準(zhǔn),就會形成移液的差錯(cuò)較大;試驗(yàn)者自身的操作習(xí)氣、加樣的一致性對復(fù)孔的CV也有很大影響。把握移液器的正確運(yùn)用和保護(hù)。關(guān)于個(gè)人的操作可操練移液動(dòng)作、加快速度,確保移液的精密度。
Q5.本底偏高,樣本值測不到
標(biāo)曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(對于高敏ELISA可以適當(dāng)放寬要求)。尤其是樣本值特別低的時(shí)分,本底過高會掩蓋意圖信號,導(dǎo)致無法測到樣本值。
在參加TMB顯色后,需實(shí)時(shí)調(diào)查標(biāo)曲顯se狀況。通常在S5孔有肉眼可見的微弱藍(lán)色,即可停止反應(yīng)。
Q6.樣本經(jīng)不同梯度稀釋,核算得到的樣本值差異較大
有時(shí)分我們不清楚樣本中意圖蛋白的濃度怎么,應(yīng)該怎么稀釋,那么我們就會做下預(yù)試驗(yàn),確認(rèn)稀釋倍數(shù)。然而有時(shí)分同一樣本做了幾個(gè)不同梯度稀釋后,核算得到的樣本值之間差異較大,應(yīng)該選擇哪一個(gè)稀釋倍數(shù)呢?
Q7.不同試劑盒中的組分能否通用
除非是公用的試劑如洗液、檢測緩沖液,其它組分不主張用其它試劑盒的組分,乃至是同一指標(biāo)不同批次的試劑盒里的組分。這些組分(包含標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、檢測抗體、酶等)都是經(jīng)過優(yōu)化的,假如貿(mào)然運(yùn)用其它試劑盒的組分,有可能對結(jié)果產(chǎn)生影響。