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試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中山羊內(nèi)啡肽(EP)水平。
用純化的山羊內(nèi)啡肽(EP)抗體包被微孔板,ELISA試劑盒制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)啡肽(EP),再與HRP標(biāo)記的內(nèi)啡肽(EP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。
TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。
顏色的深淺和樣品中的內(nèi)啡肽(EP)呈正相關(guān)。
ELISA試劑盒用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中山羊內(nèi)啡肽(EP)濃度。