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zui近,站上關(guān)于ELISA試劑盒的討論帖子非常多,今天也發(fā)表一下自己的一些看法,對ELISA的見解有不對的地方,希望指正或者直接拍磚。
首先,談一下市場。首先RnD和Bender等一些的ELISA試劑盒還是很值得信賴的,也得到了市場的認(rèn)可,特別是RnD的盒子,我們賣的很好,就是價(jià)格好貴,經(jīng)費(fèi)不是很充裕的實(shí)驗(yàn)室難消費(fèi)的起。國內(nèi)的廠家,質(zhì)量在靈敏度上和RnD的盒子還是有很大差距,但是有一點(diǎn)是可以肯定的,盒子反映的結(jié)果是公正客觀的。還有一個(gè)缺點(diǎn)就是廠家可供選擇的盒子種類比較少,主要集中在炎癥細(xì)胞因子上。
第二,談一下如何靈活應(yīng)用ELISA這個(gè)檢測方法以及如何去挑選ELISA試劑盒。ELISA這個(gè)方法的原理,大家都很清楚,網(wǎng)上的資料一大堆??烧嬲闷饋淼臅r(shí)候,有時(shí)候就有點(diǎn)犯糊涂,我談一下自己的理解。
1、有些客戶會(huì)用OVA(卵清蛋白)做一些哮喘,過敏性腸炎的模型,后來會(huì)檢測粘膜特異性的sIgA以及血清里面IgG,IgE等指標(biāo)。當(dāng)客戶向我咨詢購買這幾個(gè)指標(biāo)的盒子的時(shí)候,我很肯定地說這些指標(biāo)的檢測要你自己特制,不會(huì)有商品化的盒子出售的。
2、對于一些小分子的檢測,比如前列腺素、糖皮質(zhì)激素的檢測,我的理解是要用競爭法ELISA去檢測,也要購買采用這個(gè)方法的盒子。一般細(xì)胞因子的檢測,都是采用常規(guī)的夾心法ELISA檢測,因?yàn)橐蜃臃肿恿勘容^大,一般10幾個(gè)KD左右,很容易找到兩個(gè)或者多個(gè)抗原表位。而小分子很難找到兩個(gè)不同的表位,也就決定了包被抗體和檢測抗體無法同時(shí)結(jié)合小分子并固相化。解決方案就是酶標(biāo)板上包被二抗,每個(gè)孔加入一定量的酶標(biāo)的小分子,然后加樣品,再加不帶標(biāo)記的檢測抗體,顯色底物。樣品的目的小分子的含量越高,吸光度越低。
3、對于胰島素的檢測,我還是推薦millpore 旗下LInco公司的檢測試劑盒,不管是放免還是ELISA,據(jù)說權(quán)在他們手中。
4、做實(shí)驗(yàn)面向的ELISA試劑盒種屬主要是人,大鼠和小鼠,現(xiàn)在市面上雞、牛、馬、羊、兔各種指標(biāo)的盒子都有售,真不知道這些抗體是怎么來的,。據(jù)我所了解,這些炎癥指標(biāo)還是有很大種屬特異性的。
5、好多客戶有個(gè)誤區(qū),拿來一個(gè)指標(biāo)就想當(dāng)然地嘗試用ELISA去檢測,其實(shí)應(yīng)該多動(dòng)腦,該檢測活性的檢測活性,該做western的做western。ELISA試劑盒檢測方法簡單,靈敏度高,
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