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到70年代,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制進(jìn)入一個(gè)新的階段--全面質(zhì)量治理,推行Good Laboratory Parctice(簡(jiǎn)稱GLP)。從1949年美國(guó)College of American Pathologists(簡(jiǎn)稱CAP)首先開始研究臨床實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制(簡(jiǎn)稱質(zhì)控)問題,美國(guó)學(xué)者Levery和Jenning于1950年發(fā)表*篇關(guān)于使用質(zhì)控圖的實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控,臨床檢修實(shí)驗(yàn)室的室內(nèi)質(zhì)控工作正式拉序幕。全面質(zhì)量治理的宗旨在于預(yù)防差錯(cuò)的產(chǎn)生,質(zhì)控圖的統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的目的是檢出差錯(cuò),統(tǒng)計(jì)學(xué)的實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控是全面質(zhì)量治理中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。衛(wèi)生部臨床檢修中央免疫質(zhì)控室從1988年開始在全國(guó)范圍內(nèi)開展乙肝標(biāo)志物檢修的質(zhì)量評(píng)價(jià)流動(dòng),一直采用這一套質(zhì)量評(píng)價(jià)方法,并在實(shí)踐中不斷實(shí)踐、進(jìn)步和完善,但愿能找出一條適合中國(guó)國(guó)情的,行之有效的質(zhì)量治理的道路。由于ELISA是目前臨床上zui常用的一種免疫學(xué)檢修方法,就以ELISA試劑盒檢修為例,討論下問題。
一、質(zhì)量控制(Quaility Control,Q.C)
質(zhì)量控制是監(jiān)視全過程,排除誤差,防止變化,維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過程。這一過程是通過一個(gè)反饋環(huán)路進(jìn)行的。
(1)確定控制的對(duì)象;
(2)規(guī)定控制對(duì)象的標(biāo)準(zhǔn)(預(yù)期值);
(3)制定或選擇控制方法和手段;
(4)測(cè)量實(shí)際數(shù)據(jù);
(5)比較或較對(duì)實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異,并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍,報(bào)警系發(fā)出信號(hào),反饋通道中斷。
(6)采取行動(dòng),解決差異?;謴?fù)原狀(原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài))的手段發(fā)揮作用。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進(jìn)行。質(zhì)控圖是把某一檢驗(yàn)的性能數(shù)據(jù)與所計(jì)算出來的預(yù)期的"控制限"進(jìn)行比較的圖。這種性能數(shù)據(jù)是在按規(guī)程正常進(jìn)行時(shí),按時(shí)間順序而抽選出來的,其目的是檢測(cè)檢驗(yàn)過程中變異的"可追查"性原因。"可追逆"性的誤差原因,是指除去隨機(jī)誤差以外的其他原因。"控制限"是通過統(tǒng)計(jì)計(jì)算出來的。
二、誤差
實(shí)驗(yàn)誤差分為三種:系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差和過失誤差。系統(tǒng)誤差是指一系列測(cè)定結(jié)果與真值或靶值存在有同一傾向的誤差,有明顯的規(guī)律性,ELISA試劑盒可在一定條件下重復(fù)出現(xiàn),是可以通過質(zhì)控預(yù)防和校正的。隨機(jī)誤差又稱偶然誤差,是一種偶然的、未能預(yù)料到的誤差,是難以避免和校正的誤差。檢驗(yàn)工作中隨機(jī)誤差的分布符合正態(tài)分布規(guī)律。過失誤差是人為的責(zé)任誤差。通過加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室管理和開展質(zhì)量控制工作是可以避免的。
三、正態(tài)分布及標(biāo)準(zhǔn)差
ELISA試驗(yàn)中,檢驗(yàn)同一樣本達(dá)20次以上時(shí),就會(huì)發(fā)現(xiàn)這組數(shù)據(jù)(指測(cè)定結(jié)果的吸光值)分布在均值兩側(cè),大部分集中在均值附近。如果以測(cè)定值為橫坐標(biāo),以出現(xiàn)的頻率為縱坐標(biāo)作圖,就可繪出一個(gè)呈鐘形的曲線圖。鐘頂處為均值,其他值以均值為中心對(duì)稱分布,這就是正態(tài)分布。正態(tài)曲線以下的面積稱概率,常用樣本的均數(shù)(X)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)來表示,其計(jì)算方法如下:均值、標(biāo)準(zhǔn)差和概率的關(guān)系如下:
X±1SD,概率0.68 X±2SD,概率0.95 X±3SD,概率0.99換言之,當(dāng)ELSIA檢測(cè)同一樣本達(dá)一定次數(shù)后所得的一組數(shù)據(jù),其中靠近均值(X)的±1SD范圍內(nèi)的數(shù)據(jù),ELISA試劑盒占該組數(shù)據(jù)的68%,在X±2SD范圍內(nèi)分布的數(shù)據(jù)占總體的95%,在X±3SD范圍內(nèi)分布的數(shù)據(jù)占總體的99%。當(dāng)我們要求檢驗(yàn)結(jié)果在X±2SD范圍內(nèi)為合格時(shí),將有95%的數(shù)據(jù)可能合格。
四、質(zhì)控圖
通過以上三步驟,可以開始作室內(nèi)質(zhì)控圖,根據(jù)RCVK的和SD作質(zhì)控框圖。利用質(zhì)控圖可以對(duì)每次檢驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行監(jiān)測(cè),當(dāng)沒有更換另一批號(hào)試劑盒和另一批號(hào)質(zhì)控血清時(shí),該質(zhì)控圖可以連續(xù)作下去。
質(zhì)控血清的S/CO值低于-2SD的范圍,屬"告警",應(yīng)尋找原因并在質(zhì)控圖上記錄查出的原因。
ELISA試劑盒試驗(yàn)中,各種檢驗(yàn)項(xiàng)目的誤差允許范圍均有待在實(shí)踐中得出結(jié)論,以上只是舉例說明質(zhì)控方法,不是定論。2SD是一般*的允許誤差限度。每批測(cè)定放一份質(zhì)控血清時(shí),一次超過2SD應(yīng)作為"告警",二次超出2SD為"失控"。當(dāng)質(zhì)控過程中,出現(xiàn)失控時(shí),出現(xiàn)失控時(shí),應(yīng)查找原因,通常是試劑盒或質(zhì)控血清失效造成。更換試劑盒或更換質(zhì)控血清,找出原因糾正后重新檢驗(yàn)。如果檢驗(yàn)結(jié)果仍達(dá)不到要求或找不到原 因時(shí),應(yīng)重復(fù)進(jìn)行OCV的檢驗(yàn)。如果OCV檢驗(yàn)的結(jié)果仍是好的,說明常規(guī)操作出現(xiàn)問題。
一般認(rèn)為:①一次超出3SD;②連續(xù)二次超出2SD;③3-5次連續(xù)處于一側(cè)的2SD之內(nèi);④5~7次連續(xù)偏向橫軸的一側(cè),均為失控。
第③、④種情況,單獨(dú)依靠記錄往往是不易察覺的,但在質(zhì)控圖上可以清晰地發(fā)現(xiàn)這種失控。
五、ELISA試劑盒室間質(zhì)評(píng)的方法
A、 發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行調(diào)查
這是國(guó)內(nèi)外室間質(zhì)評(píng)的常用形式。部臨檢中心對(duì)乙肝標(biāo)志物ELISA檢驗(yàn)的室間質(zhì)評(píng)采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室,各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗(yàn),并將檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)至部臨檢中心。部臨檢中心經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,將評(píng)價(jià)結(jié)果寄回各實(shí)驗(yàn)室。通過評(píng)價(jià),各實(shí)驗(yàn)室了解本室工作質(zhì)量,發(fā)現(xiàn)差距,并設(shè)法改進(jìn),以不斷提高檢驗(yàn)質(zhì)量。
這種評(píng)價(jià)方式有一定缺點(diǎn),即各實(shí)驗(yàn)室常對(duì)質(zhì)控物特殊對(duì)待,在檢驗(yàn)時(shí)選用特殊試劑盒,選派特別的技術(shù)員進(jìn)行檢驗(yàn),有的實(shí)驗(yàn)室互相和對(duì)結(jié)果并作修改。這就使EQA的結(jié)果不能反映該實(shí)驗(yàn)室日常工作水平。
B、 派觀察員到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行試劑調(diào)查
這種調(diào)查事先不通知,臨時(shí)派觀察員到實(shí)驗(yàn)室,采用常規(guī)方法,檢驗(yàn)規(guī)定的一組標(biāo)本,進(jìn)行評(píng)價(jià)。
這種調(diào)查方式,容易發(fā)現(xiàn)該實(shí)驗(yàn)室存在的實(shí)際問題,可以直接給予指導(dǎo)和幫助,解決問題,提高檢驗(yàn)質(zhì)量。這種調(diào)查通常可以使用真實(shí)樣本,避免采用質(zhì)控物的一些缺點(diǎn)。