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本產(chǎn)品僅用于科研,不用于臨床
嘔吐毒素檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)使用說明書
1 原理及用途
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇又稱嘔吐毒素素,由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生,常出現(xiàn)在玉米(穗腐病)、小麥和大麥(赤霉?。┥?。我國谷物中DON的*為1.0mg/kg。
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測大米、小米、面等谷物及飼料樣本中的嘔吐毒素(Deoxynivalenol,DON),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的嘔吐毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗嘔吐毒素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含嘔吐毒素含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中嘔吐毒素的殘留量。
2 嘔吐毒素檢測試劑盒技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:3ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:37℃,30min~30min~15min
2.3 檢測下限:
谷物、飼料…………………………150ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
嘔吐毒素……………………………………*
3-乙?;撗跹└牭毒┐?hellip;…………<1%
2.5 樣本回收率:
谷物及配合飼料…………………………85%±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)品(黑蓋):各1ml
0ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb、243ppb
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………11ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
2X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
說明書………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20μl-200μl,100μl-1000μl、多道300μl
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:復(fù)溶液
將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 谷物(大米、玉米、小米等)及飼料處理方法
1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加10ml去離子水,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)取0.1ml上清,加入0.9ml復(fù)溶液,混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù):50 檢測下限:150ppb
6 嘔吐毒素檢測試劑盒酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50μl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50μl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100μl/孔,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.5 洗滌:同上
6.6 顯色:加底物液A 50μl/孔,再加底物液B 50μl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光顯色15分鐘。
6.7 終止:加終止液50μl/孔,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.8 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以*,即
百分吸光度值(%)=
A
×*
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 嘔吐毒素檢測試劑盒貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。